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- GB/T38164-2019畜禽动物源性成分检测标准实施 -LUMEX荧光芯片PCR法 -

  •        我国是禽畜产品生产和消费大国。食品及饲料中动物源性成分的检测关系食品安全和畜牧业安全。近年来,市场上屡次出现不法分子在肉制品中掺杂掺假现象,食品安全问题层出不穷,尤其是牛羊肉中,经常被曝光其中掺杂了一些猪肉、鸭肉甚至狐狸肉、老鼠肉等,涉嫌虚假宣传欺诈消费者和侵犯消费者的合法权益,降低食品安全的公众信誉,造成不良社会影响。食品及饲料中动物源性成分检测涉及到生产、运输、销售以及加工等各环节,农业部也相应出台各项法规,为更好保证食品安全和我国畜牧业安全生产,急需可靠的检验标准和方法手段,而GB/T38164-2019《常见畜禽动物源性成分检测方法实时荧光PCR法》颁布实施,对畜禽动物源性成分检测提供可靠监督手段,有效提高检验检疫工作效率。

          国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会联合发布GB/T38164-2019《常见畜禽动物源性成分检测方法实时荧光PCR法》该标准由中国检验检疫科学研究院、大连海关、青岛海关、上海海关、沈阳海关起草。该标准于2019年10月18日正式实施。该标准规定了了常见畜禽动物源性成分的实时荧光PCR检测方法,适用于肉及加工品、内脏、乳、动物饲料中黄牛、牦牛、水牛、绵羊、山羊、猪、骆驼、马鹿、梅花鹿、驯鹿、兔、狗、鸡、鸭、鹅、鹌鹑、鸽子、火鸡、猫、狐狸、水貂、貉、鼠物种成分的Taqman探针实时荧光PCR定性检测。

         当前国内外对于动物源性成分的检测报道主要有显微镜检法、红外光谱法、ELISA、普通 PCR、基因芯片法,荧光定量 PCR 等方法,基于核酸检测的方法是最普遍、最准确的检测技术,其常用的技术方法包括普通定性 PCR、巢式 PCR、多重 PCR、荧光定量 PCR 等方法。普通定性 PCR 方法检测效率低,尤其检测多指标样本时更加费时费力。而荧光定量 PCR 方法灵敏度高,但其成本高,因此推出一种快速、方便、灵敏度高、成本低的荧光定量PCR检测方法具有实际应用意义。
           LUMEX专利冻干芯片结合荧光定量PCR技术,与传统的荧光定量PCR方法相比,将试剂引物涂布在冻干芯片上,通过荧光定量PCR技术,实现了快速、方便、灵敏、成本低动物源成分快速检测,操作便捷,大幅度缩短了检测周期。在检测项目方面,一张基因芯片即可同时对多种靶向基因并行检测,一次实验即可得出全部结果,比传统方法简便、快捷、更节省人力,提高了检测通量,实现多重检测效果。同时极大减少了操作人员的工作量并避免了实验的人为误差,方便、快捷、准确。因冻干芯片荧光定量PCR法具有快速、简便、成本低、灵敏度高、假阳性率低、高通量等特点,在实际工作中具有很大的意义,同时对开发快速高通量多指标检测的方法具有广泛应用。LUMEX冻干芯片平台结合荧光定量PCR技术,针对中国市场中常见食品和饲料中主要动物源性成分,按照国内检测标准设计冻干检测芯片,可一次性对样品中的多种动物源性成分进行筛检,包括:牛、猪、羊、骆驼、水牛、马、驴等畜禽动物源性成分,并行反应检测目标的数量得到很大提升,克服动物源性成分荧光定量PCR检测方法的核心问题,极大地降低检测成本和工作量,提高检测效率和准确性。此外实时荧光微芯片技术可根据客户实际检测需求定制动干芯片,实现一张基因芯片检测多重靶向基因。
           实时荧光微芯片技术优势如下:1)操作简单,经过一次样本前处理,冻干芯片是平台实现 PCR 扩增,实现单芯片同步检测样本中多种动物源性成分,具有平行分析和多重判断的特点;2)检验对象完备,包含了当前市面上常见、常检的动物源性成分检测指标,并且可以很方便的加入新的检测指标;3)专利亲疏水芯片涂层结合冻干试剂,减少交叉污染,有效减少操作人员工作量,降低实验人为误,,提高了系统的灵敏度和准确性;4)冻干试剂平台简化操作步骤,操作简单,无需冷链运输,适用于食品中动物源性成分的大规模检测。检测分析与扩增结果判定:对样品进行前处理,将处理后的样品分成三等分,包括待测样品,复检样品和留存样品。依据GB/T 35918的方法进行提取,也可用等效DNA提取试剂盒提取DNA。按照GB/T34796方法测定并计算DNA浓度,判定DNA和纯度。检测过程中设置阳性对照、阴性对照和空白对照。样品和对照设置2个平行的反应体系,分别进行靶向基因和内参基因扩增, 以Ct平均值作为最终结果。如果Ct值≤35.0,判定为被检样品为阳性。如果Ct值≥40.0,判定被检样品阴性;如果35.0<Ct值<40.0,则重复一次。如再次扩增后Ct值仍为<40.0,判定被检样品阳性;如再次扩增后,Ct值≥40.0,判定被检样品阴性。

    生肉样品(n=6)的微芯片实时PCR结果:牛(粉色曲线)、羊(青色曲线)、猪(绿色曲线),只有相应的试剂盒对目标样品呈阳性,其他试剂盒呈阴性。阳性对照(蓝色曲线)和内部对照(IC)(黄色曲线)为阳性。

          结果可见,动物源成分冻干芯片检测结果准确,显示了良好的物种检测特异性,检出的成分与预先提供的检测结果一致,冻干片荧光定量PCR技术具有良好的特异性、可重复性、灵敏度和稳定性,能够同时进行多样品、多项目检测,具有快速、灵敏、准确、高通量、低成本的特点,是目前传统方法所不具备的。

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